以中和抗体抑制肿瘤成长因子β 可避免因放射治疗引起的肿瘤加速转移nhx490
(Inhibition of TGF-β with neutralizing antibodies prevents radiation-induced acceleration of metastatic cancer progression)
期刊: 临床研究期刊 (The Journal of Clinical Investigation) Volume 117 Number 5 May 2007 作者 Swati Biswas,1 Marta Guix,2 Cammie Rinehart,2 Teresa C. Dugger,2 Anna Chytil,1 Harold L. Moses,1,3,4 Michael L. Freeman,5 and Carlos L. Arteaga1,2,4 单位 属于美国田纳西州 那什维尔 范德堡大学(Vanderbilt University) 1.癌症生物学系、2.医学系、3.病理学系、4. Vanderbilt-Ingram癌症中心乳癌研究计划 以及 5.放射肿瘤学系
译注1:此为放射性治疗。 译注2:此为一癌症化学治疗常用药物,俗称「小红莓」。 译注3:此为感染此病毒之初期的产生的三种T抗原中其中一种。
讨 论
我们在基因转殖老鼠的乳癌转移模型中,研究了癌症治疗所诱发的TGF-β是否会加速肿瘤的发生。在MMTV/PyVmT基因转殖鼠中,在肺部施加游离辐射或是以doxorubicin处理,都增加了循环中的TGF-β1量、循环中肿瘤细胞数以及肺部癌症转移。循环中TGF-β1浓度增加、之后的癌症转移增加,并不需要老鼠在施加处理时就拥有肿瘤,就如同我们也在放射处理后才施打肿瘤细胞的老鼠中所观察到的。TGF-β1会增加,并不仅限于受到胸腔放射处理的诱导,因为我们在骨盆的放射处理、以及全面性施加doxorubicin下,也都观察到了TGF-β1的受诱导增加。在放射处理后,循环中肿瘤细胞的增加以及肿瘤转移的增加,都因到2G7的施加而抵销。重要的是,循环中PyVmT表现型肿瘤细胞无法在有2G7的环境下进行体外培养,这也就表示了自泌性(autocrine)TGF-β对这些细胞是一种存活的讯号。这些结果与之前两项研究是相吻合的;在这些研究中,以可溶性TβRII:Fc融合蛋白、或用反义TGF-β1(antisense TGF-β1)稳定性转染加以阻断TGF-β,都抑制了肿瘤细胞的能动性、存活率、渗入(intravasation)以及肺部癌症转移。 老鼠身上的肿瘤不含TβRII,放射线便无法在这些老鼠身上加强肺部癌症转移。为了展示此点,我们从PyVmT/TGFBR2flox/flox 与 PyVmT/TGFBR2KO之老鼠身上既成之乳腺肿瘤,取得细胞株来使用。Forrester等人曾经提出报告,以MMTV/Cre表现有条件地使TGFBR2缺失时,这些knockout PyVmT表现型的肿瘤发生潜伏期就变短了许多,并且表现出明显增加的肺部癌症转移,这是相较于PyVmT/TGFBR2flox/flox型的肿瘤。因为我们使用了静脉注射法,并且,我们所注入细胞株是从既成之含有TβRII与未含TβRII的肿瘤而来,所以我们的结果无法解释Forrester等人所报导之癌症潜伏与转移的表现。尽管我们在经放射处理的老鼠中无法排除TGF-β之增加,是否会影响宿主的微环境(microenvironment)与/或免疫系统,并进而帮助了肿瘤转移之进行,我们不含有TβRII之肿瘤的结果却强烈地显示,癌症转移之增加至少在部分上,是肇因于TGF-β在癌症细胞的直接作用。 在肿瘤细胞中,这些潜在受循环中TGF-β浓度调控的讯号反应,目前仍属未明。然而,TGF-β的助癌转移效应并不仅限于此基因转殖模型。举例说明,在MMTV/LTR启动子控制下表现有活性的TGF-β1与Neu的双基因型(bigenic)的老鼠,也表现出比MMTV/Neu更多的循环中肿瘤细胞与肺部癌症转移。会表现Neu和具活性的TGF-β1之乳腺肿瘤细胞,能侵入Matrigel并且能在transwells上移动,但却受可溶性的TβRII:Fc给阻断,表示单单Neu不足以诱导出一种侵略性的表现型。再者,在会表现具活性Neu的基因转殖肿瘤里,若共同表现具活性的突变种Alk5和TβRI,会增加肺部血管外的癌症移转(extravascular lung metastasis),这与TGF-β之效应相符:也就是肿瘤周围蛋白酶、癌症细胞的附着和侵略。PyVmT是一个强而有力的癌症基因,我们也已经知道它会活化ErK和PI3K;但2G7竟然能对如此的肿瘤细胞具备有效的抗肿瘤移转效果,有点不符合直觉。但是,这表示TGF-β可以放大癌症基因的讯号,而只要这讯号大于某一阈值,可以完全地使肿瘤移转被观察到;并且,相反地,在肿瘤基因已恶性转化的细胞(oncogene-transformed cells)内阻断TGF-β讯号时,会把这些讯号降低至比阈值更低的程度,使其无法到达癌症基因诱导癌症进行。确实如此,在鳞状细胞癌(squamous cancers)中被逼着表现的显性-具活性Smad2,已经被证实会和有活性的Ras共同作用,使不具侵略性的肿瘤转变成会转移的肿瘤;但Smad突变型不与TβRI结合,并会抑制乳癌细胞的转移。最后,在Ras经恶性转化的细胞中,显性-不具活性且被截短的TβRI表现之后,则是会抑制肿瘤的产生能力(tumorigenicity)以及癌症移转。 癌症治疗后的肿瘤再增殖(repopulation)与发展,是一众所皆知的现象。它已被证实会在放射治疗、化学治疗以及手术摘除后发生。(在参考文献37中有回顾)。TGF-β的浓度会对放射线有所反应而增加,也被发现与放射治疗后之肺脏受伤有关,这是由胶原蛋白沉积、肺泡壁的增厚以及内皮细胞受伤所致。放射线引起的肺脏组织伤害,会因为施以抗TGF-β抗体而显著地减少。在手术方面,已经有人提出,因为组织操作以及伤口复原而产生的生长激素过量释放,包括TGF-β的过量释放,会紧接着手术之后促进癌症移转。确实如此,手术之后,循环中随即发现了肿瘤细胞的存在,也发现肿瘤细胞数量的增加;而且在治疗性切除直肠癌两周之后,若循环中的TGF-β浓度居高不下,就表示癌症会很快地转移至肝脏。相反地,在手术刚切除直肠肿瘤后,血清中的TGF-β浓度却是显著地降低的。最后,以化学-放射治疗处理后期的头颈部癌症,以及以化学治疗处理非小型细胞肺癌(non-small-cell lung cancers)的情形下,循环中的TGF-β浓度已被证实和对治疗的反应相关。 在本研究中,我们展示了放射治疗与化学治疗会提升循环中的TGF-β浓度、循环中的癌症细胞数、以及癌症的移转。这些效应会因为系统性地施加2G7而被阻断,因此支持TGF-β为癌症转移进展之肇因的说法。这些数据有数个临床上的含意。第一,因癌症治疗而增加的循环中TGF-β浓度,应该要预前地探讨与监控,因为它可能是一种标记,代表肿瘤注定要在治疗之后快速地增长。第二,在循环中TGF-β浓度已被观察到增加的病人,其身上带有的肿瘤,可能会因我们施加TGF-β抑制剂而加强基本疗程的效果,也可能可以抵销与疗程相关的毒性效应,例如放射线引起的组织伤害以及纤维化。我们预期,以我们现存的方法以及尚在临床研发中的治疗用TGF-β抑制剂,这些假说在不久的将来可以被证实

放射线与化学治疗增加循环中TGF-β1浓度。 (A) 10 Gy 的放射线被施加于FVB老鼠之胸腔(thorax) (左)或骨盆腔(pelvis )(右)。24小时之后取得血液,血浆中之TGF-β1浓度以在「方法」中所述测量。(B) 八周大、带有肿瘤之MMTV/PyVmT 老鼠,或非基因转殖之FVB 老鼠,在四号乳腺脂肪垫带有200mm3以上大小之肿瘤,不作任何处理或施加10 Gy 于胸腔。血浆中TGF-β1浓度,24小时后测量之。(C) 在第八周起,每隔21天,以空白试剂或腹腔注射小红莓 (5 mg/kg i.p.),处理基因转殖老鼠三次。血浆中TGF-β1浓度在第十五周测量之。A–C 之数据代表三个不同的独立实验,每组使用三个实验对象。(D) FVB老鼠胸腔被施加10 Gy。五周后,取得经放射线处理、控制组老鼠之肺脏,及其细胞裂解液(250 μg/ml),加到含有貂肺上皮细胞的triplicate wells,这些细胞会稳定地表现plasminogen activator inhibitor–1/luciferase reporter (PAI-1/luciferase reporter)。二十四小时后,测量luciferase之表现,方法如「方法」部分中所述。图示:*表示P < 0.05, **表示P < 0.01, ***表示P < 0.001 相对于控制组。
放射线与化学治疗增加循环中肿瘤细胞量以及肺部之肿瘤转移。(A) MMTV/PyVmT母鼠在八周大时,接受胸腔放射线处理。在第十三周时,当实验终结,以心脏穿刺取得血液,并量取其细胞悬浮液在体外产生细胞集落之能力,如「方法」中所述。CTCs代表循环中肿瘤细胞(circulating tumor cells)。在下面为一些具有代表性的影像,是由血液中取得、循环中单一个肿瘤细胞形成的细胞集落。基因转殖成功的细胞集落,用PyVmT抗体和荧光之次级抗体处理,并以荧光显微镜观察并估计之。(B) 与A 同样之老鼠,在第十三周大时计算肺部表面癌症之转移数目。A和B中之数据是代表三个独立的实验,每组中有四只老鼠。从控制组以及经放射线处理之基因转殖老鼠上,取得具代表性之 H&E 染色的肺部组织切片。这些切片是胸腔放射处理后五周所取得,如下方所示。黑色箭头所指为肺部癌症转移。(C) 八周大、带有肿瘤的 MMTV/PyVmT 基因转殖老鼠,每隔21天以空白试剂或腹腔注射小红莓(5 mg/kg i.p.)处理共三次。此实验于第十五周时终结,并计算肺部表面之癌症转移数量。具代表性之H&E染色肺部切片,其含有癌症转移部分的中心如右方图示。原始放大倍率为100倍。*表示P < 0.05, **表示P < 0.01 ,相较于控制组。
放射线的先行处理,会使移转的肺癌细胞更能够拓展在原本无肿瘤的老鼠身上。(A) MMTV/PyVmT 细胞,在加有不含血清之培养基之100-mm 培养皿里,以1.25–7.5 Gy处理。受细胞所影响之培养基在72小时后进行收集,并以如「方法」中所述之ELISA得知TGF-β1之浓度。(B) 稳定表现luciferase之MMTV/PyVmT 细胞,由尾部静脉注入未交配之FVB母鼠。在接受细胞注射1小时之前,老鼠在图中所标部分之胸部,以10 Gy处理之。在注射之后2周,肺部之癌症细胞以老鼠的生物发光法进行视觉观察(顶图)。某些情形中,肺脏在添加d-luciferin之后被手术移除,并于体外进行显影(底图)。控制组如左图所示,受放射线处理之老鼠如右图所示。(C) 具代表性的整体肺部载片(顶图)以及控制组与放射线处理组之H&E肺部切片(底图;原放大倍率为100)。(D) 在控制组与放射线处理老鼠中,肺部表面癌症转移之定量(左图)与肺部重量(右图)。数据为两个独立实验中,每组的五只老鼠的平均值±标准差。图示:**表示P < 0.01, ***表示P < 0.001 ,相较于控制组。
TGF-β中和抗体2G7,阻断了放射线诱导增加的肺部癌症转移。(A和B) 八周大、 带有肿瘤的MMTV/PyVmT老鼠于胸腔接受10 Gy处理。在图中标出之部分,老鼠被每周两次施以15 mg/kg 的2G7,直到第十三周。此时进行肺部表面之癌症转移计数。(A) 数据为每组中五只老鼠的平均值 ± 标准差。(B) 代表性的H&E 染色肺部切片。此实验重复一次取得了类似的结果。(C)当实验终结,以心脏穿刺取得血液,并量取其细胞悬浮液在体外产生细胞集落之能力,如「方法」部分中所述。(D) 在第十三周,经过胸腔放射处理、带有肿瘤的基因转殖鼠,收集血液。细胞悬浮液如C图中情形,在20 μg/ml 2G7或PBS环境下,涂布于培养盘上。10-12天后,人工计数等于或大于50 μm的细胞集落。数据为每组五只老鼠的平均值±标准差。*表示P < 0.05, **表示P < 0.01 相较于控制组。
肿瘤细胞中不存在TGFβRII,能抵销受放射线诱发的肺部癌症转移之增加。(A–C) 未交配的、八周大的FVB母鼠,从尾部静脉注入稳定表现 luciferase的PyVmT/TGFBR2flox/flox 与PyVmT/TGFBR2KO 细胞。这些老鼠在注射肿瘤细胞之前,一组接受、一组未接受胸腔的10 Gy处理。两周后,以生物发光(A)、组织染色(B)、以及人工计数肺部表面癌症转移(C)的方法,来测定肺部表面癌症转移,如「方法」中所述。资料为每组中四只老鼠的平均值± 标准差。 (D) 两组细胞株的基因体DNA之PCR结果,显示重组片段的仅存在于PyVmT/TGFBR2KO细胞中。**表示P < 0.01 相较于控制组。 译者:Jeffrey Chu at Hsinchu, Taiwan. 2009/4/4 不免有所遗漏、错误,敬请参考与指正,谢谢!
倪 师 评 论
过去我一直强调,西医的化学治疗不但无效于各种癌症,反而癌症病人会因为这化学治疗,让原本的癌细胞扩散到其他内脏去,自然病情就会越来越重,等于是加速癌症病人的快速死亡,我知道这种状况一直在发生中,因为这是我的临床经验告诉我的事实,任何中医师只要知道如何使用内经中的阴阳辨证法则来做诊断法的依据,也就是说对人体内的阴阳消长非常了解的医师,都可以知道我说的是对的,多年的治癌经验告诉我,西医学所谓的正统癌症治疗法如开刀、化学治疗、放射线治疗等,不但无助于治疗癌症,反而癌症病人因为这些不当与过度的治疗,让生活质量变成如人间地狱般的痛苦,如果病人能够忍受这些痛苦,而代价是多活几年,这也还罢了,但是事实却不是这样,所有的临床证据跟美国最新的癌症研究,现在都证明了,西医的三种必杀的治癌方法,只会让癌症病人寿命活得更短,完全没有证据证明,这些所谓正统的治疗方式,可以延长病人的寿命,这种超烂的医学治疗法,现在还被台湾省的西医在沾沾自喜中,自命是正统的治疗,对中医学还不屑一顾,我个人认为只要是对病人有利的,我们就不该反对,Why not? 对不对,但是我必须要说实话,因为现在在台湾省每年都在上升的癌症病患指数,证明了台湾省在医学方面已经走错方向,这个方向再不做修正,未来还会有更多的可爱台湾省人民,痛苦又快速的死于癌症,请问读者们,如果我不出面说明,谁敢出面说出这些真话呢? 上面是美国对癌症治疗的研究报告,放射治疗与化学治疗反而会加速癌症的快速扩散,希望台湾省民众因此而觉醒过来,不要再沉迷于西医的癌症治疗法了,请尽快找中医帮你们吧,如果找不到可以信任的中医师,可以来传真,表明你的真实身分,我来帮你介绍推荐吧。
同时,感谢这位网友的协助,将这篇原文翻译成中文,以便让读者可以很轻易的阅读这篇研究报告,只有大家同心协力,才有机会将最正确的医学讯息传播出去,让世间所有的病人都能得到最好的医疗照顾,我们都很期这一天的到来,我替所有支持我们经方家的网友们,跟您说声谢谢,谢谢你替大家辛劳的付出,我心中能说的只有感谢再感谢!
汉唐中医 倪海厦
谨记于佛州2009年03月22日



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07月27日自加州来诊的那位得到恐惧症的小女孩,经过服药一周后今天来时已经没有惧怕的症状了,连青春痘都减少许多,鼻头光亮,从气色看,她体内的阳气已经回头,原先延迟六天的月经,在服药后第二天就来潮了,大便从原先的便秘,变成每天一次的大便,小便出来许多,其睡觉仍有不饱足感,